技術(shù)專欄
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Westernblot實(shí)驗(yàn)蛋白提取
貼壁細(xì)胞總蛋白提?。? 用TBS緩沖液潤洗貼壁細(xì)胞2-3次，最后一次盡量吸干殘留液。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑(使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)于培養(yǎng)板/瓶內(nèi)裂解3-5min。期間反復(fù)晃動培養(yǎng)板/瓶，使試劑與細(xì)胞充分接觸。用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞及試劑刮下，收集到1.5mL離心管中。冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解。4℃13000g離心5min，收集上清，即為總蛋白溶液。 懸浮細(xì)胞總蛋白提?。? 低速離心收集細(xì)胞，加入適當(dāng)體積的冷卻的PBS緩沖液重懸，2000rpm離心10min，吸除上清。重復(fù)以上操作兩次，收集細(xì)胞沉淀。加入適當(dāng)體積的細(xì)胞總蛋白提取試劑(使用
2021-08-14
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引物干粉使用說明
(1)引物干粉開蓋前13000rpm，室溫離心1min。 (2)加入管壁上10倍nmole數(shù)值的水(μL)的DEPC水，渦旋混勻，瞬時(shí)離心。此為引物儲備液(100μM)，用后于-20℃保存。 *引物管上一般是3.0~6.0nmole，加入十倍這個(gè)數(shù)值微升的水(30~60μL)。 (3)取一新1.5mL EP管，加入380μLDEPC水，上下游引物儲備液各吸取10μL于新EP管中，渦旋混勻，瞬時(shí)離心。此為引物工作液(2.5μM)，可直接用于實(shí)驗(yàn)，用后于4℃保存。
2021-08-14
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